做过质粒电转的科研人员，大概率都遇到过这样的情况：同样的细胞、同样的质粒、同样的操作流程，上一次实验结果很好，这一次转染效率却明显下降；或者转染效率确实提高了，但细胞死亡率也跟着上升。于是很多人的第一反应是：是不是电转参数不对？开始重新调电压、换程序、增加质粒用量，反复做了几轮之后，却发现结果依然存在波动。实际上，质粒电转并不是简单调几个参数就能够稳定解决的问题。真正影响质粒电转结果的，往往包括细胞状态、质粒质量、电转条件、电转液体系、电转后恢复以及实验操作一致性等多个环节。...

做CRISPR电转最让人焦虑的，并不是参数还没开始优化，而是实验已经做完，却不知道究竟哪里出了问题。有时细胞转完之后大量死亡；有时细胞状态很好，但检测不到明显编辑；有时前几次效果稳定，突然有一批数据异常；还有一种更直接——电转过程中出现电弧。面对这些问题，如果每次都只是“重新换个电压试一次”，不仅浪费时间，也会消耗大量细胞和CRISPR试剂。下面按照几种常见现象，梳理CRISPR电转的排查思路。情况一：电转后细胞大量死亡这是CRISPR电转中最常见的问题之一。首先需要判断的并...

CRISPR实验第一次取得理想结果时，很多研究人员都会非常兴奋。但真正决定一个课题能不能顺利推进的，往往是第二次、第三次以及后面的几十次实验。这也是CRISPR电转中最现实的问题之一：同一个实验，为什么别人可以重复，我自己却总有批次差异？对于基础科研而言，重复性影响数据可靠性；对于药物研发、细胞治疗及规模化研发而言，批次稳定性更直接影响项目进度和成本。因此，当CRISPR电转从一次探索性实验变成常规实验流程之后，关注重点也应该从“高效率”逐渐转向“稳定性”。重复性差，通常不是...

准备开展CRISPR基因编辑项目时，不少实验室都会遇到一个设备选型问题：CRISPR电转仪到底应该怎么选？搜索不同品牌之后，很容易看到大量关于最高电压、波形、程序数量以及适用样本的参数介绍。但真正做过一段时间CRISPR电转之后就会发现，设备是否好用，并不能只看“最高电压是多少”。因为对于用户而言，更现实的问题是：能不能找到适合自己细胞的条件？下一次还能不能重复？样本发生异常时能不能找到原因？换一个细胞类型之后是否还可以继续使用？出现技术问题有没有人协助？因此，如果实验室准备...

在成熟细胞系中做CRISPR实验，很多实验室已经拥有相对稳定的转染方案。但当研究对象变成原代细胞、干细胞、免疫细胞或者其他难转染细胞之后，问题往往突然增加。最典型的情况就是：编辑效率提高了，细胞却大量死亡；细胞活率保住了，CRISPR编辑效率又明显下降。这也是很多科研人员搜索“CRISPR电转”的真正原因——不是不知道电穿孔可以递送CRISPR体系，而是不知道怎样在编辑效率与细胞活率之间找到平衡。为什么难转染细胞更适合考虑CRISPR电转？传统脂质体等化学转染方式具有操作方便...

在CRISPR基因编辑实验中，设计好sgRNA、准备好Cas蛋白或表达载体，并不意味着实验就已经成功了一半。对于很多科研人员来说，真正让人头疼的往往是后面的导入环节：CRISPR电转效率不稳定、细胞死亡率偏高、同样的参数换一批细胞结果就发生明显变化。尤其是在原代细胞、干细胞、部分免疫细胞以及其他难转染细胞中，CRISPR体系能否有效进入细胞，往往直接影响后续编辑效率和实验重复性。那么，CRISPR电转到底应该从哪些环节优化？一、不要只盯着电压，细胞状态同样重要很多人在CRIS...

实验室采购分子杂交仪时，最常见的问题通常是：“这台设备多少钱？”价格当然重要。但真正使用过实验设备的人都知道，仪器采购最怕的并不是价格稍高，而是设备买回来以后发现：实验做不了；样品放不下；功能不匹配；后续增加项目又需要重新采购设备。因此，如果正在选择分子杂交仪，与其第一步就比较报价，不如先把几个关键问题弄清楚。第一个问题：你主要做什么实验？这是所有设备选型的基础。不同实验室对分子杂交仪的使用需求可能不同。有的主要进行核酸分子杂交；有的用于基因检测相关实验；有的还需要进行酶联反...

很多实验室都有一个共同现象：随着实验项目越来越多，设备也越来越多。恒温设备一台、摇床一台、杂交相关设备一台，碰到新的实验需求，还要继续增加仪器。看起来实验条件越来越符合用户使用习惯，但真正使用一段时间以后，新的问题又出现了：设备占用空间越来越大；不同实验之间需要频繁转移样品；操作步骤增加；设备利用率却不一定高。对于核酸分子杂交、酶联反应孵育、膜处理等实验来说，如果能够通过一台设备覆盖更多应用场景，实验室整体效率往往会明显提高。V-leader开云网页版登录入口VH系列分子杂交仪，就是围绕...